基因敲除技术（基因敲除技术名词解释）

本文目录一览：

• 1、基因敲除技术的原理是什么?
• 2、当前流行的基因敲除技术有哪些
• 3、基因敲除是怎样进行的?
• 4、基因敲除的操作步骤
• 5、crispr/cas9到底是什么东西?大家有关于这个的介绍和资料吗?

基因敲除技术的原理是什么?

1、基因敲除（Knock-out）Cas9可以对靶基因组进行剪切，形成DNA的双链断裂。在通常情况下，细胞会采用高效的非同源末端连接方式（NHEJ）对断裂的DNA进行修复。

2、基因敲除是用含有一定已知序列的DNA片段与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，整合至受体细胞基因组中并得到表达的一种外源DNA导入技术。

3、基因敲除 是 基因打靶技术 的一种，类似于基因的 同源重组 。指 外源DNA 与 受体细胞 基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，从而代替受体细胞基因组中的相同、相似的 基因序列 ，整合入受体细胞的基因组中。

当前流行的基因敲除技术有哪些

1、CRISPR-dCas9系统即是dCas9与转录激活因子（如VP64）或转录抑制因子（如KRAB）融合后基因敲除技术，结合sgRNA能促进或抑制目基因敲除技术的基因的表达。应用：目的基因在内源环境中过表达、诱导iPSC、抑制表达等。

2、近日基因敲除技术，中国科学家利用基因编辑技术——CRISPR/Cas9，对抑制狗骨骼肌生长的基因（MSTN）进行基因敲除技术了敲除，培育出两只肌肉发达的“大力神”狗，成功构建了世界首个基因敲除狗模型。

3、常用的基因敲除技术就是胚胎发育和体外培养。基因敲除是自80年代末以来发展起来的一种新型分子生物学技术，是通过一定的途径使机体特定的基因失活或缺失的技术。

基因敲除是怎样进行的?

1、敲除基因通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因。

2、基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。它克服了随机整合的盲目性和偶然性，是一种理想的修饰、改造生物遗传物质的方法。

3、基因敲除（Knock-out）Cas9可以对靶基因组进行剪切，形成DNA的双链断裂。在通常情况下，细胞会采用高效的非同源末端连接方式（NHEJ）对断裂的DNA进行修复。

4、依靠一个复合物，该复合物能在一段RNA指导下，定向寻找目标DNA序列，然后将该序列进行切除。

5、利用基因同源重组进行基因敲除 基因敲除是80年代后半期应用DNA 同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞（ES细胞）分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。

6、这样就可以实现基因的替换或者突变。对受精卵细胞进行基因编辑，并将其导入代孕母体中，可以实现基因编辑动物模型的构建。随着研究的深入，CRISPR/Cas技术已经被广泛的应用。

基因敲除的操作步骤

设计Genotyping引物，确认实际基因组序列与理论匹配情况，如CRISPR靶点验证与理论序列存在出入，需回到4重做。该步骤还需要确认引物扩增条件，以备后用，如不能正常扩增需要重新设计，并且不能进行下一步操作。

利用同源重组构建基因敲除动物模型的基本步骤：a.基因载体的构建：把目的基因和与细胞内靶基因特异片段同源的DNA分子都重组到带有标记基因（如neo基因，TK基因等的载体上，成为重组载体。

技术原理：生物界同源重组现象的发现，为基因打靶奠定了坚实的理论基础，而胚胎干细胞技术的发展，促进了基因打靶的广泛应用。

前阵子才写道 ： CRISPR-Cas9基因敲除实验步骤 Month 4 --可能的收官之帖（但还远未结束） 说自己收官之作，哪里想到这么快就要继续开始新的实验了。

crispr/cas9到底是什么东西?大家有关于这个的介绍和资料吗?

1、CRISPR/Cas（Clustered Regularly Interspaced Short Palindromic Repeats/Cas）系统是目前被广泛运用的基因编辑系统，其原理是由CRISPR转录产生的gRNA介导Cas核酸酶靶向目标序列，对序列进行切割。

2、是细菌的一种获得性免疫系统。Cas---CRISPR-associated CRISPR/Cas9---CRIPSR-Cas系统分为Type I、TypeII 、Type III三种类型。

3、CRISPR/Cas9系统的工作原理是 crRNA（ CRISPR-derived RNA ）通过碱基配对与 tracrRNA（trans-activating RNA ）结合形成 tracrRNA/crRNA 复合物，此复合物引导核酸酶 Cas9 蛋白在与 crRNA 配对的序列靶位点剪切双链 DNA。

4、CRISPR/Cas9 利用一段小 RNA 来识别并剪切 DNA 以降解外来核酸分子。现在使用的 CRISPR/cas 9 系统是由最简单的 type II CRISPR 改造而来，该系统由单链的 guide RNA 和有核酸内切酶活性的 Cas 9 蛋白构成。

5、CRISPRCas9靶向基因组编辑系统有两个组成部分： 内切核酸酶-Cas9 和 指导RNA-gRNA 。内切核酸酶是来自酿脓链球菌的Cas9核酸酶蛋白。