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怎样构建基因敲除小鼠模???
一般地，筛选使用正、负选择法，比如用G418筛选所有能表达neo基因的细胞，然后用Ganciclovir淘汰所有HSV-TK正常表达的细胞，剩下的细胞为命中的细胞。
基因敲除动物模型怎么做 利用基因同源重组进行基因敲除 基因敲除是80年代后半期应用DNA同源重组原理发展起来的。80年代初，胚胎干细胞（ES细胞）分离和体外培养的成功奠定了基因敲除的技术基础。
方法 PCR方法扩增两条同源臂，将两条用于同源重组的片段插入XpPNT载体，构建OPG基因敲除打靶载体。
基因敲除都需要做什么,具体内容步骤?
分析并确认基因组序列 设计Genotyping引物，确认实际基因组序列与理论匹配情况，如CRISPR靶点验证与理论序列存在出入，需回到4重做。
基因敲除的操作步骤基本是获得干细胞、载体构建、导入基因、性状改变。基因敲除就是通过同源重组将外源基因定点整合入靶细胞基因组上某一确定的位点，以达到定点修饰改造染色体上某一基因的目的的一种技术。
用在线工具确定，订购需要的oligos和引物。如果手动确定分裂位点，oligos或引物应该按照fig4b.c设计 设计ssODN模板（任选） 1 h 我们没有选这个方法--略 设计和订购定做的ssODN。
利用同源重组构建基因敲除动物模型的基本步骤：a.基因载体的构建：把目的基因和与细胞内靶基因特异片段同源的DNA分子都重组到带有标记基因（如neo基因，TK基因等的载体上，成为重组载体。
利用同源重组构建基因敲除动物模型（Animal Models）的基本步骤（图1）： ①. 基因载体的构建：把目的基因和与细胞内靶基因特异片段同源的DNA 分子都重组到带有标记基因（如neo 基因，TK 基因等）的载体上，成为重组载体。
建立条件性基因敲除需要分三步进行：通过同源重组的方法在待测删除片断的两侧引入同向的loxP位点（此步同ES细胞的打靶，只是载体不同），用Cre的瞬时表达载体转染ES细胞克隆，在Cre酶下发生DNA重排。
【手把手教你发高分文章】5步法教你构建KO细胞系
当构建好敲除细胞系之后，就需要对特定基因编辑进行充分验证，这是KO实验的最后一步了，也是最令人期待的一步。验证细胞KO是否成功需要对敲除细胞进行表征并确保工作的下游可行性。
让大家看一眼原始的图片，并明确下此行目的：将当前界面红色阳性的区域的表面积计算出来（你也可以计算明场细胞的面积，细胞核的面积等等）。
